商品屬性：

背景：

BMP-3 又稱骨生成素，是成人骨骼中含量高的 BMP，是至少15種結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的BMP 之一，屬于TGF-β超家族成員。TGF-β家族成員是細(xì)胞增殖、分化、基質(zhì)合成和凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。正如其名稱所示，BMPs 能啟動、促進(jìn)和調(diào)節(jié)骨和軟骨的發(fā)育、生長和重塑。除此以外，BMPs 還參與其他多種組織和器官的產(chǎn)前發(fā)育、產(chǎn)后生長、重塑和維護(hù)。BMP-3 大量存在于成人骨骼中，其次是胎兒軟骨。BMP-3 通過激活信號級聯(lián)，拮抗促成骨細(xì)胞生成素的信號傳導(dǎo)，從而抑制成骨和骨形成。

標(biāo)記：

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。

3.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。

實驗步驟：

1. 將細(xì)胞以 104-105 個細(xì)胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度。

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