DMEM（NaHCO3 1.5g/L）培養(yǎng)基

DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時又分為高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。本培養(yǎng)基是根據(jù)ATCC 30-2002貨號，改良的DMEM高糖的含丙酮酸鈉，含1.5g/L。

DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的縮寫，所以其特點主要包括以下：

（+） 酚   紅  （+）4.5g/L D-葡萄糖

（+）0.11g/L 丙酮酸鈉

（ - ） HEPES

培養(yǎng)基主要成份表：

（+）  丙酮酸鈉

（-）  HEPES

（+）  NAHCO3 1.5g/ L

運輸

放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法

基礎(chǔ)培養(yǎng)基2℃～8℃，培養(yǎng)添加劑 -20℃，避光，保存12個月。配置好的培養(yǎng)基2℃～8℃保存1-2個月。

質(zhì)量控制

注意事項

1、收到產(chǎn)品請先檢查包裝是否完好，如有破損，漏液、渾濁等現(xiàn)象請及時聯(lián)系我們，培養(yǎng)基凍融后，可能會有少量絮狀物析出，不影響產(chǎn)品正常使用。

2、請仔細閱讀產(chǎn)品說明書，了解產(chǎn)品使用方法、保存方式、有效期等信息，若因操作失誤，保存不當(dāng)而導(dǎo)致產(chǎn)品出現(xiàn)污染等問題的，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3、本產(chǎn)品僅能用于科研，培養(yǎng)基中的一些組分對人體有較低的危害性，如有接觸立即用大量清水沖洗即可。

注意事項：

（1）無菌操作：細菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因，必須加強各個環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養(yǎng)液：所用的培養(yǎng)液必須滿足細胞生存和生長的必要條件。由于細胞來源的動物種類、組織類型不同，對培養(yǎng)液的要求有一定的差異，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清：胎牛血清對于維持培養(yǎng)細胞的生存和促進細胞增殖起著關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的胎牛血清進行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號胎牛血清后，就保持應(yīng)用至實驗完成。想了解血清的秘密，可以參考Nothing：關(guān)于血清，你不知道的太多了

（4）：必須新鮮配制，貯存時間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導(dǎo)致消化時間過長，細胞損傷增加。

（5）L-幾乎所有細胞對有較高的要求，細胞需要核酸和蛋白質(zhì)，在缺時，細胞會因生長不良而死亡。液中很不穩(wěn)定，加有養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時，就應(yīng)重新加入原來量的

（6）靜置培養(yǎng)：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時72h)內(nèi)，應(yīng)處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時地取出培養(yǎng)瓶觀察生長狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必?fù)?dān)心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會消耗光，在細胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

（7）消化時間：一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可，因為此時組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細胞團或單個細胞，過久的消化往往導(dǎo)致細胞損傷加重，細胞培養(yǎng)成活率降低。

（8）其他生長因子：經(jīng)過以上處理，一般原代分離細胞培養(yǎng)均可以成功。對于少數(shù)特殊類型細胞也可以考慮加一些特殊的生長因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內(nèi)毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。

細胞培養(yǎng)最初認(rèn)識：

什么是細胞培養(yǎng)？ 細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。

原代培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)是指細胞從組織中分離出來后，在適宜條件下增殖，直到它們占據(jù)所有可用的基質(zhì)（即達到匯合狀態(tài)）的培養(yǎng)階段。在此階段，必須通過將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮生長培養(yǎng)基的新容器中進行繼代培養(yǎng)（即傳代），以為其提供更多的繼續(xù)生長空間。

細胞系：

第一次傳代培養(yǎng)后，原代培養(yǎng)物即被稱為細胞系。來自于原代培養(yǎng)的細胞系壽命有限（即：有限細胞系），隨著細胞的傳代，生長能力的細胞會占據(jù)優(yōu)勢，最終導(dǎo)致細胞群體在基因型和表型上達到一定程度的均一性。

細胞株：

如果通過克隆或其他方法從培養(yǎng)物中陽性篩選出了細胞系的亞群，則該細胞系成為一個細胞株。與親代細胞系起始時相比，細胞株通常會獲得一些其他的遺傳學(xué)改變。

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