傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

MKN-1人胃癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實驗完成。

（4）消化細(xì)胞時應(yīng)避免消化時間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團塊樣絮狀游離，這時的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實驗進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀棄去上清后，應(yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

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TCRP1： 舌癌耐藥相關(guān)蛋白1 0.1ml

丙型肝炎病毒-NS1抗體 KIT Others Mouse 小鼠 c-kit / CD117 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

氣道平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA 試劑盒 Dog IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞 Mouse

HUtMEC-c 人子宮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUtMEC) 500,000cells 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒 Dog IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 CM-R056大鼠腎實質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

TF-1(人血液白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA 試劑盒 Dog IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 人卵巢上皮細(xì)胞(HOSEpiC) ( 5×105 )

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大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA試劑盒 PYD  大鼠酚 96T

MS4A15： MS4A15蛋白抗體 OS-RC-2細(xì)胞，腎癌細(xì)胞 小細(xì)胞肺癌,SH-77細(xì)胞 人腎癌Wilms細(xì)胞;G401

FCGRT & B2M Others Mouse 小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠血管生成素樣蛋白2(ANGPTL2)ELISA試劑盒 Wheat germ agglutinin,WGA  麥胚凝集素/凝集蛋白 96T

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MKN-1人胃癌細(xì)胞恒河猴腎細(xì)胞;MMK2 人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA 試劑盒 c-Myc tag c-Myc tag標(biāo)簽多肽 0.5mg

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