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    原代細胞的實驗要點和注意事項說明

    點擊次數(shù):675次  更新時間:2022-07-19
       原代細胞的實驗要點:
      1、本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
     
      2、所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
     
      3、蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
     
      4、如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
     
      5、如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
     
      原代細胞的注意事項:
      1、收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。
     
      2、先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時,穩(wěn)定細胞狀態(tài),切忌在溫箱內靜置過夜。
     
      3、靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
     
      4、貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
     
      5、細胞瓶內的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆?,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件,以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。
     
      6、細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,細胞運輸和保存:
     
      可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存方式:干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。
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