介紹一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)免熱激及孵育的方法。
背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育半小時(shí)，然后42度熱激90秒，加液體培養(yǎng)基緩搖1個(gè)小時(shí)左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時(shí)間要求嚴(yán)格，熱激后大量菌細(xì)胞死亡，還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。
方法改進(jìn)：我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育的同時(shí)，將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里，當(dāng)撫育結(jié)束后，立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上，利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激，平板可以直接放回培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。由于溫度相對(duì)溫和，細(xì)胞死亡的少，之后的液體培養(yǎng)基撫育過程也省掉了。
這個(gè)方法我們一直在用，質(zhì)粒可以成功轉(zhuǎn)進(jìn)菌體中，只要感受態(tài)細(xì)胞沒有問題，其轉(zhuǎn)化率和使用熱激法差不多，而且若是新鮮制備的感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化率甚至更高。可以省下42度水浴裝置的儀器，還節(jié)省了至少1個(gè)小時(shí)的時(shí)間。
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