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    凍存的原代細(xì)胞該如何開始培養(yǎng)?

    點(diǎn)擊次數(shù):1391  更新時(shí)間:2019-12-27
    原代細(xì)胞是剛從體內(nèi)取出的組織中獲得的細(xì)胞,要求不嚴(yán)格的話,十代以內(nèi)都算原代細(xì)胞。因?yàn)殡x體不久,所以其對(duì)外界的刺激的反應(yīng)更接近體內(nèi)的實(shí)際情況,這也是為什么藥篩要用原代細(xì)胞,或者起碼要有原代細(xì)胞的驗(yàn)證。
     
    凍存的原代細(xì)胞該如何開始培養(yǎng)?
    (1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。
    (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體*融化。
    (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
    (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
    (5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負(fù)壓,開蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出,這是正?,F(xiàn)象)。
    (6) 用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。
    (7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。
    (8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。
    (9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。 
     
    原代細(xì)胞的組織塊培養(yǎng)法:
    1)組織塊接種后的前3天,在觀察和移動(dòng)的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。
     
    2)加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。
     
    3)當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長。
     
    4)為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。
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